Células madre como terapia génica

Los científicos del Instituto de Bioingeniería y Nanotecnología (IBN), han descubierto que las células madre neuronales tienen la capacidad innata para atacar las células tumorales fuera del sistema nervioso central.

La alta tasa de mortalidad de cáncer se atribuye parcialmente a la capacidad invasiva de los tumores malignos a extenderse por todo el cuerpo humano, y la ineficacia de las terapias convencionales para erradicar las células cancerosas, es por eso que un equipo de investigadores dirigido por IBN, ha hecho un descubrimiento histórico que las células madre neurales (NSC) derivados de la madre humanas pluripotentes inducidas (iPS), podrían utilizarse para tratar el cáncer de mama, ya que las IPS-NCSs son capaces de buscar con eficacia e inhibir el crecimiento del tumor y la proliferación.

Quimioterapia de dosis alta con trasplante de células madre

La quimioterapia de dosis alta con trasplante de células madre es una forma de administrar dosis altas de quimioterapia y reemplazar las células generadoras de sangre destruidas por el tratamiento de cáncer. Las células madre (células sanguíneas inmaduras) se extraen de la sangre o de la médula osea del mismo paciente o un donante, y se congelan y almacenan  Después de finalizar la quimioterapia, las células madre guardadas se descongelan y se re-inyectan al paciente mediante una infusión  Estas células madre re-inyectadas crecen y se restauran las células sanguíneas en el cuerpo. 

Referencias:

http://www.medicalpress.es/un-descubrimiento-prometedor-para-la-terapia-del-cancer-de-mama

http://www.cancer.gov/espanol/pdq/tratamiento/seno/Patient/page5 

http://www.danien.com/uploads/articulos/pelucas-barcelona__350.jpg

http://images.lainformacion.com/cms/las-celulas-madre-almacenadas-podrian-revertir-los-efectos-de-la-esterilidad-en-pacientes-de-cancer-infantiles/2012_11_2_jpT9Mh0q3uFCvaXi0NEhX5.jpg?width=642&height=482&type=height&id=YKNedPQyaol7T0tI6gvBn4&time=1351876448&project=lainformacion

Terapia génica en cáncer de mama

Para iniciar veamos que es y de que se trata la terapia génica:

El campo de la terapia génica se esta desarrollando con rapidez y amplió las posibilidades de tratamientos nuevos para el cáncer de mama.
La terapia génica en un comienzo fue prevista para la corrección de defectos genéticos hereditarios.

En la actualidad, se han desarrollado distintas estrategias en terapia génica del cáncer, y se están realizando
diversos ensayos clínicos para tratar diferentes tipos de cáncer: de mama, ovario, cabeza y cuello, pulmón, próstata, células renales, tumor cerebral, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, linfomas, melanoma, mieloma múltiple y neuroblastoma.
A continuación se enumeran las diferentes estrategiasaplicadas en los ensayos clínicos realizados en terapia
génica del cáncer:
– Aumentar la actividad antitumoral de células inmunes por medio de citoquinas (interleucinas, factores de necrosis tumoral, factores estimulantes de colonias o interferones).
– Aumentar la inmunogenicidad del tumor introduciendo antígenos foráneos (“vacunas tumorales”).
– Introducir un gen “suicida” o de sensibilidad aumentada a determinados fármacos. Se transduce el gen de
una enzima (timidina cinasa) que activa selectivamente un profármaco (aciclovir).
– Bloquear la expresión de oncogenes mediante terapia antisentido.
– Introducir genes supresores de tumores (p53).
– Eliminación de las células tumorales mediante adenovirus oncolíticos.
– Transferencia de genes con efecto antiangiogénico, para inhibir la formación de vasos sanguíneos inducidos por el propio tumor.
– Introducir genes de resistencia a fármacos para reducir la toxicidad de la quimioterapia, particularmente
sobre la médula ósea.

Referencias: 
http://www.sefh.es/bibliotecavirtual/fhtomo2/CAP06.pdf
https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhwrL2GEOU-i7eHoC9nKRFt5Cs4N52we9Hj_UYbxbYqurW3tMeLzLhLO6yByoMw8-hj7eaQ_OzD8S90OVGU0KAv97xlzQzSY_leOf-05WMdqQSTWxVNdOI-315qjfDmuTfpaJmLfkHLjdc/s1600/terapia+genica3.jpg
http://www.youtube.com/watch?v=CqYYy9uTiTA

Transgénicos

RATONES KNOCK-IN UN NUEVO MODELO PARA EL ESTUDIO DEL CÁNCER

Un knock-in génico es cuando la tecnología nos ha permitido la incorporación de una secuencia codificante al mensaje de un gen endógeno preseleccionado

Este knock-in se lo puede realizar inactivando por interrupción el gen endógeno, produciendo una sustitución funcional del mismo por la secuencia codificante introducida; o respetándolo dando lugar a una adición génica.

El modelo knock-in de los ratones es muy útil para poder explorar el efecto que tienen las mutaciones específicas en los protooncogenes y/o genes supresores de tumores humanos

Referencias:
http://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=Xgq-kjkRcG4C&oi=fnd&pg=PA89&dq=transg%C3%A9nicos+en+cancer+de+mama&ots=t2x5lgQUtJ&sig=5SR94C0Ygii7SHzAfRGZazX1GUQ#v=onepage&q=transg%C3%A9nicos%20en%20cancer%20de%20mama&f=false
http://criptomundo.files.wordpress.com/2011/07/ratones.jpg

Construcción de una genoteca genómica de Pinus pinaster

Para poder conocer la estrucctura y organización de los genomas vegetales es necesario la clonación molecular de grandes fragmentos de secuencias genómicas para construir genotecas representativas.

La construcción de genotecas genómicas en cromosomas artificiales de bacterias es una de las herramientas mas utilizadas con este fin y la estrategia elegida en este trabajo; pero cuando se trabaja con especies que presentan genomas muy grandes como el pino, realizar este tipo de genotecas es laborioso y costoso.

En este tipo de genoteca la calidad del vector BAC es clave porque esta directamente relacionada con la eficacia de la transformación, en este caso se utilizo el vector pCUGIBAC1

Para la construcción de genoteca en grupos de clones es necesario utilizar varios procesos como:
incubación, suspensión de las células, ligación, resuspención, agitación, dilución, almacenamiento, extracción.

Los grupos de la genoteca se pueden rastrear por PCR utilizando como molde el ADN de los BAC de cada grupo y un par de cebadores que cubran una región del gen de interés.

Vocabulario:
Genoteca: es una colección de clones cada uno de los cuales contiene un vector al que se le ha insertado un fragmento de ADN derivado del ADN o del ARN totales de una célula o un tejido.
BAC: cromosomas artificiales de bacterias

Referencias:
http://www.inia.es/gcontrec/pub/238-249_Nueva_estrategia_1229946066375.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Genoteca

ADN recombinante en la naturaleza

ALIMENTOS TRANSGÉNICOS

Los alimentos transgénicos son el más reciente fruto de la evolución tecnológica, aunque su conocimiento es incipiente e incompleto.

La ingeniería genética permite aislar desde un organismo la secuencia de interés de ADN y propagarlo en otro organismo, permitiendo obtener cantidades ilimitadas del producto codificado por dicho gen; a esto se denomina ADN recombinante, el cual se introduce en un microorganismo, que se cultiva y selecciona por su resistencia al antibiótico  Al crecer se expresa el gen de interés y se introduce en el vegetal que se desea modificar, obteniéndose el producto transgénico.

El ADN recombinante ha sido muy utilizado en el campo de la medicina ya que ha permitido el desarrollo de importantes avances terapéuticos como por ejemplo la producción de insulina recombinante

En los alimentos transgénicos lo que se hace es buscar un gen que codifique una proteína; como por ejemplo una enzima que intervenga en la maduración de los frutos o en la producción de un compuesto inhibidor de multiplicación viral o de una característica estructural, que le confiera un aumento de contenido de nutrientes o una mayor tolerancia a un herbicida.

Referencias:
http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=s0717-75182003000100003&script=sci_arttext

http://vidasustentable.org/wp-content/uploads/2012/06/transgenicos.jpg

http://docentes.educacion.navarra.es/~metayosa/3esogenetica11_clip_image001.gif

ADN recombinante en cáncer de mama

En terapia génica se usa la tecnología del ADN recombinante para corregir un gen defectuoso y reemplazarlo, en el mejor de los casos, por el gen normal en forma permanente.

Este tipo de terapia puede ser:

- De tipo somática, que tiene validez solo para el individuo que la recibe y para la que existe gran consenso en su utilidad.

- De tipo germinal, en la que no solo se modificará la información genética del individuo que la recibe sino también de sus descendientes, ésta técnica tiene insospechada consecuencias  por lo que despierta grandes reservas éticas y es censurada por la inmensa mayoría de científicos.

En la actualidad, ya se están llevando a cabo varios intentos clínicamente controlados de terapia génica humana.

El PGH es un proyecto de investigación que permite:

1) conocer la secuencia de todo el ADN humano

2) identificar los 30000 genes

3) conocer los genes involucrados en enfermedades genéticas, aquí se destaca el cáncer de mama

El PGH tiene un impacto a nivel ético, legal y social. Un ejemplo emblemático es el gen que da susceptibilidad a cáncer de mama en algunas mujeres (oncogen BRACA); si una mujer se realiza el test para este gen, ¿tienen derecho las aseguradoras de salud y los empleadores conocer esta información antes de asegurar o emplear?

Finalmente el PGH contribuirá al desarrollo de nuevas drogas que permitan un tratamiento mas individualizado para cada paciente de acuerdo a su constitución genética.

Vocabulario: 

* PGH: Proyecto Génoma Humano


Refernecias:
http://www.scielo.cl/pdf/abioeth/v10n2/art07.pdf
http://www.trinityatierra.com/wp-content/uploads/2012/09/vacunas.gif

Mecanismos Genéticos Moleculares en cáncer de mama

Gracias a los últimos avances de la biología celular y molecular, los eventos cruciales de la carcinogénesis, progresión tumoral y la metástasis, están siendo analizados a nivel molecular.

Los laboratorios de Biología Molecular pueden brindar una importante información predictiva y ayudar a guiar las maniobras terapéuticas.

Entre estos nuevos podemos citar:

* Amplificación y/o sobreexpresión de oncogenes

* Secreción aumentada de factores de crecimiento

* Índice de proliferación celular

* Ploidía

* Proteínas inducidas por los estrógenos

* Proteínas del stress y  Golpe de calor

* Expresión de moléculas relacionadas con la metástasis

Un nuevo mecanismo genético molecular es la interacción clave entre BRCA1 y una proteína llamada RHAMM (codificada por el gen HMMR). Estas dos proteínas actúan en un mecanismo molecular antes desconocido, que regula la polaridad de las células epiteliales. 

Los investigadores han demostrado que BRCA1 y RHAMM controlan el desarrollo normal de las células epiteliales de mama; si uno o ambos genes presentan mutaciones, el desarrollo normal de las células mamarias se altera de manera que aumenta el riesgo de que aparezca un tipo específico de tumor.

Vocabulario: 

- Carcinogénesis: Inducción del cáncer, es un proceso de múltiples etapas y cada una se relaciona con uno o mas eventos mutacionales, ocurriendo una acumulación de lesiones génicas y cambios epigenéticos las cuales pueden ser variables, pudiendose tratar como deleciones, traslocaciones y amplificaciones génicas.

- Metástasis: propagación de un foco canceroso a un órgano distinto de aquel en el que se inició.

- Ploidía: es el número de juegos completos de cromosomas en una célula biológica.

Referencias: 

http://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=f5ynXCz-zZcC&oi=fnd&pg=PA151&dq=mecanismos+geneticos+moleculares+para+cancer+de+mama&ots=AiY785rB6Z&sig=4bkYXCctGzXOVtM7SlIWifGZjZU#v=onepage&q&f=false

http://www.saludymedicina.org/oncologia/cancer-de-mama
http://www.biotechspain.com/assets_db/news/assets/image_103113859233.jpg
http://mexico.cnn.com/media/2010/10/20/tumor.jpg
http://enciclopedia.us.es/index.php/Carcinog%C3%A9nesis
http://es.wikipedia.org/wiki/Met%C3%A1stasis
http://es.wikipedia.org/wiki/Ploid%C3%ADa

Microarray en cáncer de mama

Utilizando el análisis de microarrays Affymetrix de captura por láser

La angiogénesis es esencial para el crecimiento de tumores sólidos, mientras que los perfiles moleculares de los vasos sanguíneos del tumor se han notificado a ser diferente entre los tipos de cáncer. Aunque actualmente las estrategias anti-angiogénicos disponibles están proporcionando alguna promesa para el tratamiento de algunos tipos de cáncer tal vez no sea sorprendente que, ninguno de los agentes anti-angiogénicos disponibles trabajen en todos los tumores. Por lo tanto, se requiere el descubrimiento de nuevos anti-angiogénicos objetivos, pertinentes para tipos individuales de cáncer.

Utilizando el análisis de MICROARRAYS DE AFFYMETRIX de láser capturados, se diferencia los vasos sanguíneos angiogénicos asociados al carcinoma ductal invasivo (IDC) de la mama, en comparación con los vasos sanguíneos de los pacientes con cáncer de mama.

Microarray experimentos

ARN de las muestras LCM se amplificó utilizando el WT (transcriptoma entero) que es un sistema de amplificación de ARN (2 ciclos), y el ADNc fue fragmentado y marcado utilizando el Módulo FL-Ovation  de ADNc. A pesar de 2 ciclos de amplificación puede introducir un sesgo más de un ciclo, tuvimos cuidado en el control de esta amplificando tanto el cáncer y las muestras normales de forma idéntica.
Etiquetados ADNc microarray,  se realizaron en hibridaciones HG-U133 Plus 2 arrays (Affymetrix) y datos de expresión génica se analizó utilizando Bioconductor 2,2 se ejecuta en R2.7.1.
Medidas normalizadas expresión probeset se calcularon usando el  paquete 'Affy' robusto promedio multichip (RMA) método por defecto. La expresión génica diferencial entre grupos se evaluó duplicadas utilizando un Bayes empírico t-test como se aplica en el paquete 'limma'. Los valores resultantes se ajustaron para múltiples pruebas usando la Tasa de Falso Descubrimiento (FDR)
Los datos de Affymetrix se analizaron con el software Ingenuity Pathways Analysis
El análisis adicional de Microarray se realizó sobre muestras de xenoinjertos humanos U87 (Métodos S1).

Vocabulario:

ARNsi: Es el ARN pequeño de interferencia

ADNc: Es el ADN complementario

Referencias:

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3462779/

http://farm9.staticflickr.com/8014/7368185910_19626ca62b_b.jpg

PCR en cáncer de mama

El objetivo de la PCR fue determinar la prevalencia de la mutación 185delAG.

Extracción de DNA de sangre periférica

Análisis de la mutación 185delAG: Para detectar la mutación 185delAG se utilizó la técnica de un mismatch PCR que es un método para la detección de una mutación puntual que no produce ni destruye un sitio de restricción; utiliza primers o cebadores para complementar la secuencia del ADN. El ADN amplificado mutante (a diferencia de la amplificación de ADN normal), cuando se digiere con endonucleasas apropiadas, electroforesis y se sondeó con un oligonucleótido marcado apropiado, revela un nuevo fragmento, menor restricción. Alternativamente, los primers o cebadores de PCR mismatch pueden ser diseñados para crear un nuevo sitio de restricción con el ADN normal, pero no con el ADN mutante.
La técnica usada genera dos bandas de 150pb y de 20pb para el alelo normal y solo una de 170pb para el alelo mutado, pues la enzima de restricción no corta el producto amplificado si esta presente la mutación.

La confirmación de la mutación 185delAG fue realizada por:

1. Amplificación por PCR del Exon 2 del Gen BRCA1 y Electroforesis en geles denaturantes de acrilamida-bisacrilamida

2. Hibridación alelo específica: consiste en los siguientes pasos:

a) Transferencia del  DNA a soporte sólido mediante la técnica de Dot Blotting
b) Marcación del oligonucleótido en el extremo 3'OH con digoxigenina-11-dd UTP
c) Hibridación de los filtros con el oligonucleótido marcado con digoxigenina-11-dd UTP
d) Detección de la hibridación mediante quimioluminicencia

3. Secuenciación directa

Vocabulario:

- Buffer: También llamado tampón químico; es un sistema constituido por un ácido debil y su base conjugada; o por una base y un ácido conjugado que tiene la capacidad de tamponante, es decir, que puede oponerse a grandes cambios de pH en una disolución acuosa.
- Oligonucleótido: secuencia corta de DNA o RNA, con 50 pares de bases o menos
- pb: pares de bases

Referencias:
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872002001000005
http://www.scielo.cl/fbpe/img/rmc/v130n10/img05-01.gif

http://www.scielo.cl/fbpe/img/rmc/v130n10/img05-02.gif
http://es.wikipedia.org/wiki/Buffer
http://es.wikipedia.org/wiki/Oligonucleotido

Toma de muestra para técnicas de biología molecular de cáncer de mama

La biopsia selectiva del ganglio centinela (BSGC), es la técnica mas adecuada en la estadificación regional del cáncer de mama.

Se considera como ganglio centinela (GC) desde el punto de vista de la gammagrafía a aquel o aquellos que presentan migración desde el tumor mediante un canal linfático o ante la  no evidencia de dicho canal, aquel o aquellos que aparecen en uno o varios territorios de drenaje linfático.

Se consideran ganglios centinelas secundarios a aquellos que presentan una captación del trazador con menor intensidad claramente diferenciada

Se consideran como ganglios centinela con el trazador isotrópico, en el acto quirúrgico  aquel que presenta una actividad representativa y que esta ubicado en el área preseleccionada gammagraficamente
y se considera secundario aquel que tenga menos del 10% de la máxima actividad

En la intervención se define como ganglio centinela con el colorante todo ganglio que aparezca teñido de azul o al que fluye un conducto linfático azulado.

En la actualidad la aplicación de técnicas de biología molecular (PCR) debe realizarse solo en un marco de investigación.

Referencias: 
http://www.elsevier.es/sites/default/files/elsevier/pdf/36/36v82n03a13109517pdf001.pdf
http://lamordida.net/wp-content/uploads/2011/08/ganglios.jpg

Pruebas de tamizaje para cáncer de mama

Para la detección temprana de esta patología, la literatura internacional reporta la importancia de la MAMOGRAFÍA como prueba de tamizaje, en mujeres de 50 a 64 años y recomienda hacerla cada dos años, teniendo en cuenta que para este grupo etáreo ha sido efectiva en reducir la mortalidad en un 23%. sin embargo, su uso tiende a generar inequidades entre grupos poblacionales por los costos que tiene la tecnología de alta complejidad. 

Otras estrategias de tamizaje pueden organizarse de diferente forma. 

Tamizaje de oportunidad: es cuando una mujer asintomática obtiene una pruba de tamizaje por fuera de un programa formal, lo cual facilita el diagnóstico temprano de las lesiones no palpables.

Tamizaje organizado: cuando se ha establecido un programa formal de tamizaje, en el que debe cumplir ciertos requerimientos y normas técnicas y administrativas, lo cual permite que el tamizaje sea de aplicado en condiciones óptimas. 

Estas normas son:

- Definir la población que incluya categorías específicas de edad

- Definir las pruebas que se utilizaran y los intervalos de aplicación

- Establecer un equipo responsable de su implementación

- Garantizar la oferta y accesibilidad a instituciones de salud para el diagnóstico y tratamiento oportunos

- Establecer un programa de aseguramiento de la calidad

- Detectar la ocurrencia de la enfermedad en la población

- Definir una metodología de evaluación y seguimiento.

Auto-examen: este debe realizarse una vez al mes, después de la menstruación, si no se tiene menstruación entonces hay que realizar el auto-examen el mismo día de cada mes. 

Glosario:

- Grupo etáreo: grupos de edad en que se divide la población.

- Prueba de tamizaje: proceso mediante el cual se utiliza una prueba que determina la detección temprana de factores de riesgo, infección asintomática o estadios tempranos de una enfermedad clínica, por lo tanto permite un diagnostico temprano y una intervención o tratamiento temprano

Referencias:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0124-00642008000400007&script=sci_arttext
http://www.cancer.gov.co/documentos/RevistaCC2005%20Vol%209(3)/rcc2005v09n3a04p93-105.pdf
http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070917100038AA0wVwd
http://www.slideshare.net/malebranche18/prueba-de-tamizaje
http://www.youtube.com/watch?v=oH9GmIiTg4Q

Cáncer de mama

El cáncer de mama, es una de las principales causas de muerte por cáncer en el país.

El desarrollo de una neoplasia esta directamente relacionado con mutaciones genéticas sucesivas en las que están involucrados oncogenes celulares.

En el caso de cáncer de mama, se sabe que el oncogén Her2/neu (Human epidermal growth factor receptor-2) esta amplificado en un 30% de los casos aproximadamente.

Glosario

- Neoplasia: proceso de proliferación descontrolada de las células en un tejido u órgano.

- Oncogén: gen anormal o activado que procede de la mutación de un alelo de un gen normal llamado protooncogén. Los oncogenes son los encargados de la transformación de la célula normal en una maligna que desarrollara un determinado tipo de cáncer.

Referencias: 
http://www.biomed.uninet.edu/2006/n2/sanmiguel.html

http://www.youtube.com/watch?v=druBEupr7eM

http://es.wikipedia.org/wiki/Neoplasia

http://es.wikipedia.org/wiki/Oncog%C3%A9n

Dedicatoria

Bienvenidos ustedes a mi blog...

Este blog dedicado a mi familia, que me ha brindado su apoyo, ayudándome a salir adelante en todas las circunstancias de mi vida.
Gracias papi, mami y ñaño, por hacerme una persona de bien. Los quiero mucho!!